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为了保证检验得以顺利进行，血迹检验通常采取肉眼检查、须备试验、确证试验、种属试验、血型测定、性别检验和出血部位检验等的顺序。 一、肉眼检查 肉眼检查是要发现血迹，观察其颜色、形态和部位，以便为下一步的检验做好准备和打下基础，并为确定案件性质，分析判断案情提供帮助。 在杀人、伤害等暴力性案件中，现场物体上、被害人和罪犯身上都可能留有血迹。一般说来，血迹比较明显可见，并不难发观，但有时却需要仔细检查寻找才可能发现。 新鲜血液的颜色为鲜红色，流出体外后由于血红蛋白的变化而逐渐变为暗红色、暗褐色，陈旧或经温热过的血迹，呈灰褐色，腐败血迹呈淡绿色或绿色。血迹如果附着在深色物体上，颜色不明显。酱油、油漆、果汁、色素染料、被锈等斑迹，其颜色也可与血迹的颜色相似，应注意区别。 血迹因形成时的条件不同，形状各异，大致有这么几种类型： 1．滴状血迹 血液垂直滴落在地面或物体上，形成圆滴状血迹。其具体形状又因滴落的高度和运动方向的不同而有区别。如果血液从0.1米以内的高度落下来，血迹边缘呈完整的圆状；从0.5米左右的高度落下时，圆点边缘可有明显的锯齿状；从1米以上商度落下时，圆点边缘不仅可见锯齿状，而且圆点周围往往有逗点状或线状小血滴。如果血液在受伤者行进的或从运动的物体(如车辆)上滴落，血迹呈椭圆形，一端似星芒状突起，突起的尖端指向运动的方向。 2.喷溅状血迹 动脉血管破裂，由于心脏收缩产生的压力和动脉血管壁的回缩弹力作用，血液喷射而出，在附近物体上形成状似惊叹号的喷溅血滴，其尖端指向喷溅方向。若用钝器重复打击而受伤出血，也可形成喷溅血迹，但其大小、形状不一，分布分散。 3.流柱状血迹 血液从创口流出，沿着身体或其他物体由高向低往下流，形成上薄下厚，上淡下浓的条状血迹。 4.擦拭状血迹 染有血液的物体或创口与其他物体接触，并发生移动和摩擦，可以形成面积较大，浓淡不均的擦拭状血迹。 5．接触状血迹 染有血液的物体或创口与其他物体接触，未发生移动或摩擦，可以留下血印痕迹，如血手印、血脚印。接触状血迹能反应出染血物体或创口的外表形象特征。 6．血泊 血液大量流出，聚集成片，就可以形成血泊。血泊所在地常常就是受伤或被杀的第一现场。 此外，注意查看血迹遗留的位置和部位，有助于分析被伤杀者受伤时或临死前的活动情况和当时所处的位置、姿势。 二、预备试验 该试验为初步的、试探性的血迹检验，目的是为了解决有无血迹存在的可能性。预备试验方法简便，灵敏度高，但特异性差。阳性结果，只能证明检材上有血迹存在的可能性，而不能肯定就是血迹。当然该试验的阴性结果，可以排除有血迹存在的可能，也就不必再进行下一步的检验了。 血迹预备试验的方法很多，常见的有联苯胺试验、酚酞试验、氨基比林试验、鲁米诺发光试验、紫外线检查等。 1.联苯胺试验 本试验灵敏度极高，只需微量检材即可进行。试验时，取少量检材，放置在白色滤纸或白磁板上，然后依次滴入冰醋酸，联苯胺无水酒精饱和溶液和3％的过氧化氢各一滴。如果检材上有血迹存在，就会出现翠蓝色反应，但这种反应其他物质也可能出现，并非血迹所特有。因而，该试验若成阳性反应，只能说明检材上可能有血迹。 2．紫外线检查 血迹在紫外线照射下呈土棕色反应，因而，利用紫外线进行检查，可以鉴别有无血迹存在的可能。 3．酚酞试验 与联苯胺试验一样，该试验的灵敏度也非常高。试验时，取少量检材置白磁板上，用蒸馏水浸湿检材，加还原酚酞试剂和3％过氧化氢各一滴，如是血迹，立即出现红色。 4．鲁米诺发光试验 用鲁米诺0.1克，过氧化钠0.5克，加蒸馏水100毫升配制试剂。试验时将所配试剂装入玻璃喷雾器内，在暗室内或夜晚对检材进行喷射。如为血迹，就会呈现出明显的青白色发光现象。这一反应，也不具有特异性。 三、确证试验 经过预备试验，如果检材呈阳性反应，说明有血迹存在的可能性，需进一步进行确证试验，以明确是不是血迹。与预备试验相反，确证试验特异性强，但灵敏度较低，如果检材条件差，如经日晒雨淋、混有杂质或已腐败的血迹，则难以出现阳性反应。因而确证试验的阳性结果可以肯定为血迹，阴性结果却不能完全排除血迹存在的可能性。 确证试验的方法也很多，如血色原结晶试验、氯化血红紫结晶试验和光谱检查等。 1．血色原结晶试验 血迹中的血红蛋白，在碱性溶液中分解成正铁血铁素和变性珠蛋白，再与还原剂作用，正铁血红素还原成血红素，与变性珠蛋白或者其他含氮化合物结合可生成血色原结晶。根据这一原理进行试验，利用血色原结晶出现情况就可以确定是否血迹。试验时，先用10％氢氧化钠水溶液3毫升，吡啶3毫升和30％葡萄糖水溶液l0毫升混合配制成试剂。取少量检材，置于载玻片上，加所配试剂1—2滴，盖上盖玻片，梢加热至冒小气泡，冷却后镜检。如为血迹，可出现樱红色针状、菊花状或星状血色原结晶。 2．氯化血红素结晶试验 血液中血红蛋白用酸作用破坏球蛋白，生成正铁血红素，与冰醋酸、氯化钠作用，则生成游离氯，正铁血红素与游离氯作用生成褐色菱形氯化血红素结晶。根据达一原理，试验时，先用10％氯化钠溶液2毫升，冰醋酸10毫升和无水酒精5毫升配制试剂，取检材少许，置于载玻片上，加试剂1—2滴，盖上盖玻片，稍加热，待冷却后镜检。如系血迹，可见到褐色菱形结晶。 3.光谱检查 日光通过有色液体时，其中某种波长的光线被吸收，在光谱上出现条状阴影的吸收线。血迹中血红蛋白及其衍生物均为有色物质，有很强的选择吸收光谱的性能，具有特定的吸收线。根据这一特性，用显微分光镜检查，可以鉴别是否血迹。光谱检查，灵敏度高，简便易行。 四、种属试验 经过预备试验和确证试验确定为血迹后，还需要鉴别其种属，确定是人血还是动物血。 血迹种属试验的方法也很多，如沉淀反应、琼脂扩散试验、对流电泳试验、抗人球蛋白消耗试验、纤维蛋白板试验、胶乳颗粒凝集试验和红细胞凝集试验等。 1．沉淀反应 人和各种动物的蛋白质都具有种属特异性，将种属不同的蛋白质分别注射入家兔体内，在家免的血清中就会产生对所注射的蛋白质起特异反应的物质。这种物质再与相应的蛋白质作用，就会发生沉淀反应，出现白色沉淀环。通常我们把血清中这种起特异反应的物质叫着抗体，把注入的蛋白质叫作抗原，能与抗原发生沉淀反应的抗体血清叫免疫血清或沉淀素血清。免疫血清中的抗体只与相应的抗原发生沉淀反应。例如，注入人体蛋白质获得的抗人免疫血清，只与人体蛋白质发生沉淀反应，而不与动物蛋白质发生沉淀反应。同样，注入某类动物(如猪、牛、羊等)蛋白质获得的抗该类动物免疫血清，也只与该类动物蛋白质发生沉淀反应，而不与人或其他动物的蛋白质发失沉淀反应。 根据这一现象，我们就可以通过制取免疫血清来鉴别血迹的种属。试验时，将检材浸出液与抗人免疫血清重叠，如果呈阳性反应，即在检材浸出液与抗人免疫血清之间的接触面上生成白色沉淀环，便可证明是人血。同样要确定检材是何种动物的血迹，就用各种抗动物免疫血清与检材浸出液相作用，看是否发生沉淀反应，以此来推断种属。 2．琼脂扩散试验 试验时，先用琼脂在玻璃板上制成琼脂板，在琼脂板中央打一小洞，距此洞周围1.5厘米处，再打上数个小孔。将检材浸出液注入中央洞穴内，再在周围小孔内分别注入抗人免疫血清和对照液。如是人血，则盛有检材浸出液和抗人血清的两洞孔之间，经过扩散就会形成一条白色沉淀带。 五、血型测定 测定血型是血迹检验中最主要的检验项目之一，人体血液中含有各种血型物质，可以用来测定血型。法医实践中，如前所述，血型种类很多，目前最常进行的是ABO系统血型和MN系统血型的测定。 1．ABO系统血型的测定 红细胞中抗原(凝集原)与血清中相应的抗体(凝集素)结合，如A抗原和抗A抗体相结合，红细胞会发生凝集反应，凝集成块状或颗粒状。根据这种凝集反应就可以判定血型。例如，用预先制备的抗A、抗B标准血清，分别与检材稀释液结合，如果检材与抗A血清结合后红细胞发生凝集，而与抗B血清结合后，红细胞不发生凝集，即可证明检材红细胞中含有A凝集原，检材为A型血；如果与抗A血清结合后红细胞不发生凝集，与抗B血清结合后，红细胞发生凝集，说明检材红细胞中含有B凝集原，检材为B型血；如果分别与抗A、抗B血清结合后，红细胞都发生凝集反应，说明检材红细胞中含有A、B两种凝集原，检材为AB型血；如果与抗A、抗B血清结合后，红细胞都不发生凝集，说明检材红细胞不含A、B凝集原，检材则为O型血。 血迹ABO系统的测定方法主要有两种，一种叫凝集素检验法，即通过检验血迹中有无抗A、抗B凝集素来确定血型。另一种叫凝集原检验法，即通过检验血迹中有无A、B凝集原来测定血型。 (1)凝集素检验法：将检材分为两等份，分别置于栽玻片上的A、B两端。用0.1％的A型红细胞悬液1滴滴在A端检材上，用0.1％B型红细胞悬液1滴滴在B端检材上，盖上盖玻片。再镜检看有无红细胞凝集反应。如果A端检材出现红细胞凝集反应，证明检材中有抗A凝集素，检材可判定为B型血迹；B端检材出现红细胞凝集反应，说明检材中有抗B凝集素，检材可判定为A型血迹；如果A、B两端均凝集，证明检材中含有抗A、抗B两种凝集素，检材为O型血迹；如果A、B两端均不发生凝集，表明检材中无凝集素或者已被破坏而无法检出，检材或者为AB型血迹，或者无法判定。 凝集素容易受到外界条件的破坏，因此，该检验法只适用于血液和新鲜血迹的血型测定。 (2)凝集原检验法：它是通过验凝集原的有无来测定血型的一种方法。由于凝集原保存时间轻长，一般不易破坏，因此，要测定陈旧血迹的血型，可用凝集原检验法。这一检验通常采用吸收试验、热解离试验和混合凝集试验三种方法来进行。 第一、吸收试验：红细胞凝集原与血清中相应的凝集素相结合时，前者能使后者被吸收而减少或者消失。如A凝集原吸收坑A凝集素，B凝集原吸收抗B凝集素。但是，这种吸收只能是相应的凝集原与凝集素之向的吸收，而不能在不同的凝集原和凝集索之间吸收。如A凝集原就不能吸收抗B凝集素，B凝集原就不能吸收抗A凝集素。根据这种吸收现象，可以测知检材的血型。 试验时，将检材一分为二，分别浸泡在抗A、抗B标准血清中，让检材与血清充分结合后，将浸泡液稀释，再分别加入A型、B型红细胞悬液去探测稀释液中有无抗A、抗B凝集素存在，是否已被捡材凝集原吸收而消失。检材被抗A凝集素血清浸泡稀释后，再加入A型红细胞悬液，如果红细胞发生凝集反应，说明抗A凝集素没有被捡材吸收，检材中无A凝集原，因而检材不是A型血；如果红细胞不发生凝集，说明抗A凝集素已被检材吸收，检材中有A凝集原，因而检材可判定为A型血迹。余此可以类推，吸收试验结果可靠，但所需时间较长，检材需要量较大，不宜用作微量血迹的检验。 第二、热解离试验：试验时，让血迹中凝集原分别与抗A、抗B血清中的凝集素结合后，清除未被吸收的凝集素，加热至55～56℃，被吸收的凝集素又可解离出来。再加入A、B型红细胞悬液，观察有无凝集反应。如果加入A型红细胞悬液而发生凝集反应，说明检材中含有A凝集原，血型为A型。加入B型红细胞悬液而发生凝集者，说明检材中含B凝集原，血型为B型。均凝集者，说明检材中含A、B两种凝集原血型为AB型。均不凝集者，证明检材中不含A、B凝集原，血型为O型。 该试验灵敏、迅速，所需检材量少，但技术条件要求高，操作规程严格。 第三、混合凝集试验：本试验采用双重结合的办法，让检材中凝集原与血清中抗A、抗B凝集素充分结合后，清除游离血清，再加入相应的A型、B型红细胞悬液，则悬液中的红细胞与已结合的抗A、抗B血清重新结合，出现红细胞凝集或吸附反应。如果加入的是抗A血清和A型红细胞悬液，检材出现这种反应，说明检材为A型血迹。如果加入的是抗B血清和B型红细胞悬液，出现这一反应，说明检树为B型血迹。而无论加入抗A血清和A型红细胞悬液，还是加入抗B血清和B型红细胞悬液，都出现这一反应，检材为AB型血迹。都不出现反应，检材为O型血迹。 2．血迹MN系统的血型检验 血型测定，一般先进行ABO系统血型测定，再进行MN系统血型测定。MN血型测定的方法与ABO血型测定的方法基本相同。先制备抗M、抗N血清，检验时，用抗M、抗N血清分别浸泡检材，再将浸泡液稀释，根据稀释液中抗M、抗N抗体被吸收的情况来测定血型。如果抗M抗体被吸收而消失，说明检材中有M凝集原，检材为M型血迹，若抗N抗体被吸收，检材为N型血迹。都被吸收，检材为MN型血迹。 六、血迹的性别检验 人类细胞核中有23对染色体，其中有一对为性染色体。正常女烛的性染色体为XX，正常男性的性染色体为XY。根据性染色体的这种差异，可以区分性别。血液白细胞核内存在有性染色质，根据检材中X、Y染色质的检出率，可以判定检材是女人血迹还是男人血迹。 血迹性别检验的方法，主要有两种：X染色质检出法和Y染色质检出法。其中以Y染色质检出法或两种并用法获得的检验结果较为可靠。 血迹检验除以上六个方面的项目外，有时根据案情需要，还须对出血部位、血迹新旧程度和出血量等进行检验和判断。 |
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